Исходные измерения
Для работы понадобятся Зарегистрированная флуоресценция, Фон флуоресценции, Плотность на длине возбуждения, Плотность на длине испускания. Это измеряемые характеристики пробы, прибора или калибровочного раствора. По этой причине в данной методике нельзя заменять исходные показания значениями из другого прибора без предварительного переноса градуировки.
Другие поля задают условия метода: Чувствительность, усл. ед./(мг/л), Коэффициент разбавления. Их нельзя произвольно менять после измерения: это приведёт к пересчёту аналитического результата. Для расчёта «флуориметрия с поправкой на внутреннее поглощение» особенно важно записать в лабораторном журнале все условия подготовки пробы: объёмные операции, настройку измерителя и значения стандартов.
Формула и последовательность вычислений
Учитывает ослабление возбуждающего и испускаемого излучения, возвращая концентрацию флуорофора. Записанная в калькуляторе формула: Fиспр=(F−Fфон)10^[(Aвозб+Aисп)/2]; c=Fиспр D/k. Величины связаны именно этим уравнением; оно описывает математическую постановку «флуориметрия с поправкой на внутреннее поглощение», а не произвольный пересчёт сигналов.
Сначала рассчитывается измерительный отклик или поправка, затем оценивается искомое содержание и вспомогательные показатели. При недопустимой комбинации данных — например, если проба оказывается за границей калибровки, — расчёт выдаёт пояснение. Для самопроверки начните с величины «зарегистрированная флуоресценция»: проследите, как меняются промежуточные значения при её увеличении на пять процентов.
Как оценить результат
Не ограничивайтесь одним числом. Изучите рассчитанные сопутствующие параметры: они показывают роль фона, условий измерения, поправок или неопределённости. У расчёта «флуориметрия с поправкой на внутреннее поглощение» точность прежде всего ограничена выбранной математической моделью и качеством измеренных данных.
Для проверки измените один из входов в пределах его погрешности измерения. Если итог слишком чувствителен к небольшим колебаниям, стоит повторить измерение или расширить градуировочную серию. Если «фон флуоресценции» получено с большой неопределённостью, полезно повторить опыт и сравнить результаты вместо немедленного увеличения числа знаков после запятой.
Ограничения лабораторной модели
Поправка внутреннего фильтра приближённая и пригодна для геометрии с возбуждением и наблюдением под прямым углом. Это ограничение обязательно для «флуориметрия с поправкой на внутреннее поглощение»: иначе даже математически точный ответ нельзя считать достоверной лабораторной оценкой.
Показания реального оборудования могут зависеть от состава растворителя, температуры, примесей и качества холостой пробы. Эти влияния нельзя автоматически включить в расчёт без соответствующих измеренных величин. Проверьте экспериментально, выполняется ли допущение: Поправка внутреннего фильтра приближённая и пригодна для геометрии с возбуждением и наблюдением под прямым углом. Особенно полезен контрольный раствор известной концентрации и измерение холостой пробы.
Пример расчёта и самопроверка
В форме уже указаны контрольные значения. Нажмите «Рассчитать» и изучите показанные результаты, затем замените одну из исходных величин. В частности, при проверке «флуориметрия с поправкой на внутреннее поглощение» зафиксируйте введённое значение «зарегистрированная флуоресценция», чтобы сравнения двух опытов оставались воспроизводимыми.
Если расчёт связан с концентрацией, полезно сравнить ответ с анализом контрольного раствора известного состава. Измерительный метод достоверен лишь в проверенном диапазоне. При подготовке отчёта также укажите условия градуировки и исходные показания; один результат без данных о приготовлении пробы недостаточен для подтверждения анализа «флуориметрия с поправкой на внутреннее поглощение».
Формула расчёта
Fиспр=(F−Fфон)10^[(Aвозб+Aисп)/2]; c=Fиспр D/k.
Проверенные примеры
Зарегистрированная флуоресценция = 1950 ; Фон флуоресценции = 80 ; Плотность на длине возбуждения = 0.17 ; Плотность на длине испускания = 0.11 ; Чувствительность, усл. ед./(мг/л) = 1200 ; Коэффициент разбавления = 3
Содержание флуорофора, мг/л = 6.4533; Исправленный сигнал флуоресценции = 2581.32; Коэффициент внутреннего фильтра = 1.38038; Доля ослабления измеренного сигнала, % = 27.5564
Зарегистрированная флуоресценция = 4036.5 ; Фон флуоресценции = 80 ; Плотность на длине возбуждения = 0.17 ; Плотность на длине испускания = 0.11 ; Чувствительность, усл. ед./(мг/л) = 1200 ; Коэффициент разбавления = 3
Содержание флуорофора, мг/л = 13.6537; Исправленный сигнал флуоресценции = 5461.49; Коэффициент внутреннего фильтра = 1.38038; Доля ослабления измеренного сигнала, % = 27.5564
Зарегистрированная флуоресценция = 1950 ; Фон флуоресценции = 165.6 ; Плотность на длине возбуждения = 0.17 ; Плотность на длине испускания = 0.11 ; Чувствительность, усл. ед./(мг/л) = 1200 ; Коэффициент разбавления = 3
Содержание флуорофора, мг/л = 6.15789; Исправленный сигнал флуоресценции = 2463.16; Коэффициент внутреннего фильтра = 1.38038; Доля ослабления измеренного сигнала, % = 27.5564
Как пользоваться онлайн-калькулятором
- Укажите «Зарегистрированная флуоресценция»; убедитесь, что величина соответствует данной пробе и выбранным единицам.
- Укажите «Фон флуоресценции»; убедитесь, что величина соответствует данной пробе и выбранным единицам.
- Укажите «Плотность на длине возбуждения»; убедитесь, что величина соответствует данной пробе и выбранным единицам.
- Укажите «Плотность на длине испускания»; убедитесь, что величина соответствует данной пробе и выбранным единицам.
- Заполните остальные поля формы и запустите расчёт.
- Сопоставьте полученные показатели с областью применимости и контрольным опытом.