Зачем нужен счётный диапазон
Чашки, на которых выросло меньше 30 колоний, статистически ненадёжны: при таком числе случайная ошибка по Пуассону превышает 18 %. Если колоний больше 300, они сливаются и подсчёт занижается. Поэтому для расчёта берут только чашки внутри счётного диапазона.
Калькулятор сам отбирает подходящие чашки, показывает в таблице, какие из них учтены, и предупреждает, если ни одна чашка не попала в диапазон. В этом случае результат помечается как приближённый, и посев лучше повторить при другом разведении.
Как считается концентрация
Концентрация равна сумме колоний на учтённых чашках, делённой на объём посева и на сумму долей исходной пробы, содержащихся в посевах. Такой подход соответствует взвешенной формуле для нескольких разведений и совпадает с классической записью N = ΣC / (V · (n₁ + 0,1·n₂) · d).
Если у вас одно разведение, формула вырождается в среднее число колоний на чашку, делённое на объём и на степень разведения. Предварительное разведение пробы, например суспендирование грамма почвы в 9 мл воды, вводится отдельным множителем.
Погрешность и доверительные границы
Число колоний подчиняется распределению Пуассона, поэтому относительная погрешность при суммарном счёте S колоний равна примерно 1,96 / √S для 95 % доверия. Подсчёт трёх чашек по 40 колоний даёт погрешность около 18 %, а по 150 колоний ещё меньше.
Эта оценка отражает только случайность посева. Ошибки пипетирования, неполное перемешивание, агрегаты клеток и несовершенство среды добавляют свою долю, поэтому на практике воспроизводимость между повторами составляет от 10 до 30 %.
Рост культуры и время удвоения
Сравнив концентрации в двух точках времени, можно найти число генераций g = log₂(N / N₀), время удвоения t/g и удельную скорость роста μ. Эти показатели используют при сравнении сред, температур и штаммов и при планировании времени отбора пробы.
Для надёжной оценки интервал должен лежать в логарифмической фазе. В лаг-фазе и стационарной фазе время удвоения оказывается завышенным, а культуры с автолизом дают отрицательный прирост, и расчёт сообщит об ошибке.
Выбор разведений для следующего посева
Дополнительная таблица показывает, сколько колоний ожидается на чашке при разведениях от нуля до девяти шагов. Строки, подходящие для счётного диапазона, помечены; их используют при планировании следующих серий, чтобы не тратить чашки впустую.
Для образцов с неизвестной обсеменённостью микробиологи высевают сразу несколько соседних разведений. Калькулятор поддерживает две серии подряд, сочетая их в единый результат и показывая вклад каждой чашки.
Формула расчёта
N = ΣC / ( V · Σ(1 / dᵢ) ); g = log₂(N / N₀); t₂ = Δt / g
Проверенные примеры
Найти КОЕ в 1 мл исходного образца.
КОЕ в 1 мл: 450000.0, погрешность ±16.87 %.
Учесть только чашки в диапазоне 30–300.
Учтено чашек: 2, КОЕ в 1 мл: 44500000.0.
Как пользоваться онлайн-калькулятором
- Выберите схему посева: одно разведение или две соседние серии.
- Укажите объём посева, шаг и номер разведения, предварительное разведение пробы.
- Внесите число колоний на каждой чашке, по одной строке на чашку.
- При необходимости включите расчёт роста и введите начальную концентрацию и время.